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高液相色譜儀1100測定分析人血漿中雙氯西林和阿莫西林
發表時間:2018/6/27 17:04:25  |  點擊率:670

 1,儀器與試劑

 安捷倫高效液相色譜儀1100,附紫外檢測器(SPD-10Avp/10Avvp);2010色譜工作站;AT-230ColumnHeater。雙氯西林的精製品、阿莫西林精製品(內標氟氯西林精製品(含量94.0%)、內標替硝唑精製品(含量97.2%);甲醇、乙腈均為一級色譜純,純度99.9%);水為去離子水;其餘試劑均為分析純。

 

 2,色譜條件

 雙氯西林的色譜條件:色譜柱(150mm×4.6mm,5);流動相0.05mol-L磷酸鹽緩衝液(取磷酸二氫鉀2.7g,溶於1000mL去離子水中,用氫氧化鉀溶液調pH4.5,過濾)一乙腈(68:32),加0.3%三乙胺;流速1.0mL·min~;檢測波長225nm;柱溫25;進樣量20trL;內標氟氯西林。阿莫西林的色譜條件:島津Shim—packVP—ODS色譜柱(150mm×4。6mm,5);流動相0.033mol·L磷酸鹽緩衝液(取磷酸二氫鉀2.22g、磷酸氫二鉀2.610g,溶於1000mL去離子水中用氫氧化鉀溶液調pH7。2,過濾)一甲醇(88:12)流速1.0mL·min~;檢測波長229nm;柱溫20℃進樣量20trL;內標替硝唑。

 3,血漿樣品的處理與測定

 精密移取空白血漿450L,分別加人雙氯西林或阿莫西林標準工作液50,內標氟氯西林或替硝儲備液5,混勻後,加入冷凍的甲醇500,旋渦混合,置於4℃冰箱15min,14000r·min一離心10min,取20L上清液進樣。

 4,方法與結果

 色譜分離在上述色譜條件下,雙氯西林及內標氟氯西林與血漿得到完全分離,其保留時間分別為7.1min和5.5min。

 阿莫西林具有兩性化合物的性質,且與血漿中的極性物質性質相近,因此血漿樣品預處理與色譜分離十分困難。資源等用固相萃取法、CarlqvistJ等用柱切換法來進行樣品預處理,但儀器設備複雜、操作煩瑣。故阿莫西林HPLC法多用直接沉澱蛋白法來處理血樣,調控柱溫的方式,建立了相同的樣品預處理方法,不同的色譜條件分離分析人血漿中雙氯西林和阿莫西林的高效液相色譜法

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